BD流式細胞儀又稱熒光激活的細胞分選器,作為進行流式細胞分析的儀器,它集電子技術(shù)、計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、圖像技術(shù)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)理論于一體,是一種非常先進的檢測儀器,被譽為生物醫(yī)學(xué)實驗室的“CT”。流式細胞術(shù)已經(jīng)成為一種用途廣泛和先進的細胞分析技術(shù),在細胞生物學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)等基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。
細胞周期是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程,細胞的遺傳物質(zhì)復(fù)制并均等地分配給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細胞在分裂結(jié)束后暫時離開細胞周期,停止細胞分裂,執(zhí)行一定生物學(xué)功能(G0期)。
由于細胞周期各時相的DNA含量不同,通常正常細胞的G1/G0期具有二倍體細胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍體細胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結(jié)合,其熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量。因此,通過
BD流式細胞儀PI染色法對細胞內(nèi)DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對應(yīng)的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率。
PI即碘化丙錠,可以與細胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合。PI不能通過細胞膜完整的細胞(如活細胞和早期凋亡細胞),在標(biāo)本制備時,必須先用乙醇或其他破膜劑增強細胞膜的通透性,才能使PI進入細胞內(nèi)與細胞內(nèi)的核酸結(jié)合。乙醇通常為終濃度為70%的冷乙醇。
如果應(yīng)用于
BD流式細胞儀,采用RNA抑制劑將RNA消化后,通過流式細胞術(shù)檢測到的與DNA結(jié)合的PI的熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量的多少。當(dāng)然,PI也可用于作細胞核染色,作為觀察或定量細胞的方法。